Apesar de ter nascido em Washington, Samuel Leroy Jackson cresceu e passou boa parte da vida em Chattanooga, no Tennessee. É casado com Latanya Richardson, também atriz e produtora, com quem tem uma filha, Zoe. Cursou Artes Dramáticas na faculdade Morehouse College, de Atlanta, onde cofundou um grupo chamado "Just Us Theater", se formando em 1972.

Foi para Nova York em 1977, onde teve algumas participações não muito significativas, mas foi em torno dos anos 90 que Samuel L. Jackson surgiu como um dos mais respeitados atores de Holywood. E tudo começou com ''Febre da Selva'', em 1991, filme de outro aluno da Morehouse, Spike Lee. O filme rendeu ao ator premiação no Festival de Cannes. E a partir de então sua carreira decolou. 

Em 1994 Samuel estrelou ''Parque dos Dinossauros'' e ''Perigo para a Sociedade''. Logo depois veio sua magnífica participação em ''Pulp Fiction - Tempo de Violência'', de Quentin Tarantino, rendendo-lhe indicação ao Oscar de Ator Coadjuvante. Em 1996 participou de cinco produções: ''O Despertar de um Pesadelo'', ação com Geena Davis; ''Tempo de Matar'', adaptação do livro de John Grisham que rendeu ao ator um de seus melhores papéis; ''Ponto de Encontro'', filme independente de seu amigo Steve Buscemi; ''O Trambique do Século''; e ''Jogada de Risco'', do então estreante Paul Thomas Anderson.

Por uma trajetória brilhante, Samuel L. Jackson chamou a atenção de George Lucas, que o escalou para um dos maiores sucessos da década, ''Star Wars - Episódio I: A Ameaça Fantasma''. Jackson fez o cavaleiro Jedi Mace Windu, papel secundário mas com certa importância.

Samuel L. Jackson tem em sua filmografia nomes como: Kong: A Ilha Da Caveira (2017); A Lenda De Tarzan (2016); Os Oito Odiados (2015) e Django Livre (2012), ambos de Quentin Tarantino; Kingsman - Serviço Secreto (2015); Vingadores - Era De Ultron (2015); Robocop (2014); Thor (2011) e Star Wars - episódios II e III.

Sem contar as participações especiais como em Uma Linda Mulher (1990) e com dublagem, em Bastardos Inglórios (2009) e Os Incríveis (2004).