Supresos e contentes com o imenso sucesso de As Tartarugas Ninja (2014) em sua estreia, os produtores anunciaram a sequência no próprio fim de semana do lançamento nos Estados Unidos.
Em uma cena, um carro aparece com a placa "Mirage84". A primeira vez que as Tartarugas Ninjas apareceram nos quadrinhos foi em uma edição da Mirage Comics em 1984.
A roupa do Mestre Splinter foi redesenhada para homenagear os trajes clássicos utilizados pelo personagem em suas aparições anteriores.
O ator Stephen Amell, em entrevista, comparou o seu personagem Casey Jones com Oliver Queen, o protagonista da série Arrow: "Casey Jones é muito parecido com o Oliver Queen que as pessoas conhecem das atigas HQ's".
O Gene Mutante que aparece no filme é roxo. Apenas em uma oportunidade ele teve uma coloração que não verde, em um episódio da série animada.
Judith Hoag, que interpretou April O'neil em uma oportunidade, chegou a gravar uma breve participação neste novo filme - mas, infelizmente, ficou de fora da versão final do longa.
Os produtores tentaram contar com as participações especiais dos atores Elias Koteas (o primeiro a interpretar Casey Jones nos cinemas) e Sam Rockwell (um mebro do Clã do Pé). Entretanto os dois se recusaram a participar.
O veículo utilizado neste filme pelas tartarugas é uma combinação de vários carros que eles já haviam utilizado em episódios da série animada.
Na cena em que Casey Jones está fazendo uma investigação em um bar, é possível ouvir uma música do rapper Vanilla Ice. Ele participou de uma antológica cena com as Tartarugas mandando um beat box em As Tartarugas Ninja 2 - O Segredo de Ooze (1991)
O diretor Dave Green, que substitui Jonathan Liebsman, era fanático pelas tartarugas quando criança - ele costumava se vestir de Donatello.
Esta é a primeira vez em que Casey Jones aparece de cabelo curto, sem seu tradicional mullet. Também é a primeira vez que o Destruidror aparece de barba - quando normalmente está de cara limpa.
O ator Pete Ploszek assumiu a vaga de Johnny Knoxville, que não retorna para o papel de Leonardo.
Este é o primeiro filme live action a contar om os personagens Bepop e Rocksteady.
Em uma cena, durante a parada de Halloween, um dos personagens está fantasiado de Bumblebee, um dos personagens mais populares da série Transformers, berço de muitos membros da produção - especialmente Michael Bay.
April usa, em uma cena de investigação, o crachá de Renet Tilley. Nos quadrinhos, Renet é uma viajante do tempo que se alia às Tartarugas
Megan Fox, Alan Ritchson e Stephen Amell já foram atores convidados da série New Girl.
Kevin Eastman, o criador das Tartarugas Ninjas aparece em uma cena como um entregador de pizza.